class=\"container-fluid\">支持数据相关产品产品使用协议BackgroundPathwaysCitations & ReviewsOn Page MenuProductsPrimary AntibodiesPhospho-p53 (Ser37) AntibodyPhospho-p53 (Ser37) Antibody#9289Reviews ()Citations (159)Filter:WBWestern blot 分析提取物使用 Phospho-p53 (Ser37) Antibody（上）或 p53 Antibody #9282（下）使用 UV 或 MMS 处理的 COS 细胞，以及使用 UV 处理的 293 细胞。显示更少显示更多图片库详细了解我们如何获取图像 × Phospho- p53 (Ser37) 抗体 9289 在暗模式和亮模式之间切换过滤器：WB Western blot analysis of extracts from使用 Phospho-p53 (Ser37) Antibody（上图）或 p53 Antibody #9282（下图），用紫外线或 MMS 处理 COS 细胞，用紫外线处理 293 细胞。购买#9289Cat。 ＃sizeQty.price9289S100µl $ 345

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Antibody GuaranteeFAQTech Support-- Datasheet --Without ImagesWith ImagesSDS: Choose Your Region美国-英国欧洲-中国欧洲-荷兰欧洲-英国欧洲-法国欧洲-德国欧洲- 意大利语欧洲 - 韩国语欧洲 - 葡萄牙语欧洲 - 西班牙语欧洲 - 瑞典分析证书支持数据相关产品产品使用方案背景途径引文和评论支持数据反应性 H Mk灵敏度内源性 MW (kDa)53SOURCER 兔应用程序密钥：WB-Western BlotIP-免疫沉淀 IHC-免疫组织化学 ChIP-Chromatin 免疫沉淀 C&R-CUT&RUNC&T-CUT&TagDB-Dot BloteCLIP-eCLIPIF-免疫荧光F-流式细胞术物种交叉反应键：H-HumanM-MouseR-RatHm-HamsterMk-MonkeyVir-VirusMi-MinkC-ChickenDm-D。 melanogasterX-XenopusZ-ZebrafishB-BovineDg-DogPg-PigSc-S。酿酒酵母 Ce-C. elegansHr-HorseGP-Guinea PigRab-RabbitAll-All Species Expected相关产品

产品信息

产品使用信息ApplicationDilutionWestern Blotting1:1000StorageSupplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ ml BSA 和 50% 甘油。储存于 –20°C。不要等分抗体。方案选择您的方案Western BlottingPRINT

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Western Blotting Protocol

对于蛋白质印迹，将膜与稀释的一抗在 5% w/v BSA、1X 中孵育TBS，0.1% Tween® 20，4°C 轻轻摇动，过夜。

注意：有关推荐的抗体稀释度，请参阅一抗产品网页。

A.溶液和试剂

从样品制备到检测，Western Blot 所需的试剂现在都在一个方便的试剂盒中：#12957 Western Blotting Application Solutions Kit

注意：使用反渗透去离子 (RODI) 水或同等等级的水制备溶液。

20X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：(#9808) 要制备 1 L 1X PBS：将 50 ml 20X PBS 添加到 950 ml dH2O 中，混合。10X Tris 缓冲盐水 (TBS)：(#12498) 要制备 1 L 1X TBS ：添加 100 ml 10X 至 900 ml dH2O，mix.1X SDS 样品缓冲液：蓝色加载包 (#7722) 或红色加载包 (#7723) 通过将 1/10 体积的 30X DTT 添加到 1 体积的3X SDS 加载缓冲区。用 dH2O 稀释至 1X。10X Tris-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：(#4050) 要制备 1 L 1X 电泳缓冲液：将 100 ml 10X 电泳缓冲液添加到 900 ml dH2O 中，混合。10X Tris-甘氨酸转移缓冲液：(#12539)要制备 1 L 1X 转移缓冲液：将 100 ml 10X 转移缓冲液添加到 200 ml 甲醇 + 700 ml dH2O 中，混合。10X Tris Buffered Saline with Tween® 20 (TBST)：(#9997) 制备 1 L 1X TBST：将 100 ml 10X TBST 添加至 900 ml dH2O，混合。脱脂奶粉：(#9999)。封闭缓冲液：1X TBST 含 5% w/v 脱脂奶粉；对于 150 ml，将 7.5 g 脱脂奶粉添加到 150 ml 1X TBST 中并充分混合。洗涤缓冲液：(#9997) 1X TBST。牛血清白蛋白 (BSA)：(#9998)。一抗稀释缓冲液：1X TBST 与 5 ％牛血清白蛋白；对于 20 ml，将 1.0 g BSA 添加到 20 ml 1X TBST 中并充分混合。生物素化蛋白 Ladder 检测包：(#7727)。蓝色预染蛋白标记物，宽范围 (11-250 kDa)：(#59329)。印迹膜和纸：(#12369) 该方案已针对硝酸纤维素膜进行了优化。通常建议孔径为 0.2 µm。与 HRP 偶联的二抗：抗兔 IgG，HRP 连接抗体 (#7074)。检测试剂：SignalFire™ ECL 试剂 (#6883)。B. Protein BlottingA general protocol for sample preparation. 通过在所需时间内添加含有调节剂的新鲜培养基来处理细胞。用 1X PBS 清洗细胞；通过添加 1X SDS 样品缓冲液吸出裂解细胞（6 孔板每孔 100 µl 或 10 cm 直径板每孔 500 µl）。立即从板上刮下细胞并将提取物转移到微量离心管中。保持在冰上。超声处理 10-15 秒以完成细胞裂解和剪切 DNA（以降低样品粘度）。将 20 µl 样品加热至 95-100°C 5 分钟；在冰上冷却。微量离心 5 分钟。

将 20 µl 上样到 SDS-PAGE 凝胶（10 厘米 x 10 厘米）上。

注意：上样预染分子量标记（#59329，10 µl/ lane) 来验证电转移和生物素化蛋白质阶梯 (#7727, 10 µl/lane) 以确定分子量。

电转移到硝酸纤维素膜 (#12369).C.膜封闭和抗体孵育

注意：体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜；对于不同尺寸的膜，相应地调整体积。

I.膜封闭（可选）转移后，在室温下用 25 ml TBS 清洗硝酸纤维素膜 5 分钟。在 25 ml 封闭液中孵育膜室温下缓冲 1 小时。用 15 ml TBST.II 洗涤 3 次，每次 5 分钟。一抗孵育在 10 ml 一抗稀释缓冲液中孵育膜和一抗（按照产品网页中推荐的适当稀释度和稀释剂），在 4°C 下轻轻搅拌过夜。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。将膜与 Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody（#7074，1:2000）和抗生物素、HRP-linked Antibody（#7075，1:1000–1:3000）一起孵育，以检测 10 ml 中的生物素化蛋白质标记物在室温下轻轻搅拌封闭缓冲液 1 小时。用 15 ml TBST 洗涤 3 次，每次 5 分钟。继续检测（D 部分）。蛋白质检测使用说明：在 TBST 中将膜结合的 HRP（抗体偶联物）洗涤 3 次，每次 5 分钟。通过稀释一份 2X 试剂 A 和一份 2X 试剂 B（例如，用于 10毫升，加入 5 毫升试剂 A 和 5 毫升试剂 B）。混合孔。用膜孵育底物 1 分钟，去除多余的溶液（膜保持湿润），用塑料包裹并暴露在 X 光胶片上。

* 避免反复接触皮肤。

2005 年 6 月发布

2020 年 6 月修订

方案 ID：10

特异性/灵敏度Phospho-p53 (Ser37) 抗体检测内源性仅当丝氨酸 37 磷酸化时 p53 水平。它不与其他位点磷酸化的 p53 发生交叉反应。物种反应性：

人类、猴子

来源/纯化

多克隆抗体是通过使用与人 p53 的 Ser37 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种而产生的。抗体通过蛋白 A 和肽亲和层析纯化。

背景

p53 肿瘤抑制蛋白在细胞对 DNA 损伤和其他基因组畸变的反应中起主要作用。 p53 的激活可导致细胞周期停滞和 DNA 修复或细胞凋亡小号（1）。 p53 在体内的多个位点被磷酸化，并在体外被几种不同的蛋白激酶磷酸化 (2,3)。 DNA 损伤会诱导 p53 在 Ser15 和 Ser20 位点的磷酸化，并导致 p53 与其负调节因子（癌蛋白 MDM2）之间的相互作用减少 (4)。 MDM2 通过靶向泛素化和蛋白酶体降解来抑制 p53 积累 (5,6)。 p53 可在 Ser15 和 Ser37 位点被 ATM、ATR 和 DNA-PK 磷酸化。磷酸化会削弱 MDM2 结合 p53 的能力，促进 p53 的积累和激活以响应 DNA 损伤 (4,7)。 Chk2 和 Chk1 可以在 Ser20 位点磷酸化 p53，增强其四聚化、稳定性和活性 (8,9)。 p53 在体内 (10,11) 处在 Ser392 位点被磷酸化，在体外被 CAK (11) 磷酸化。 p53 在 Ser392 位点的磷酸化在人类肿瘤中增加 (12)，据报道会影响 p53 的生长抑制功能、DNA 结合和转录激活 (10,13,14)。 p53 在 Ser6 位点磷酸化d 在体外和体内通过 CK1δ 和 CK1ε 激活 Ser9 (13,15)。 p53 在 Ser46 位点的磷酸化可调节 p53 诱导细胞凋亡的能力 (16)。 p53 的乙酰化由 p300 和 CBP 乙酰转移酶介导。通过 p19 (ARF) 抑制 MDM2 募集 HDAC1 复合物的脱乙酰作用可稳定 p53。乙酰化似乎在应激反应中 p53 蛋白的积累中发挥积极作用 (17)。 DNA 损伤后，人 p53 在 Lys382（小鼠中的 Lys379）位点在体内被乙酰化以增强 p53-DNA 结合 (18)。 p53 的去乙酰化是通过与 SIRT1 蛋白的相互作用发生的，SIRT1 蛋白是一种可能参与细胞衰老和 DNA 损伤反应的脱乙酰酶 (19)。

Levine, A.J. (1997) Cell 88, 323-31.Meek, D.W. (1994) Semin Cancer Biol 5, 203-10.Milczarek, G.J.等。 (1997) Life Sci 60, 1-11.Shieh, S.Y.等。 (1997) Cell 91, 325-34.Chehab, N.H. 等人。 (1999) Proc Natl Acad Sci U S A 96, 13777-82.Honda, R. 等。 (1997) FEBS Lett 420, 25-7.Tibbetts, R.S.电子等。 (1999) Genes Dev 13, 152-7.Shieh, S.Y.等。 (1999) EMBO J 18, 1815-23.Hirao, A. 等人。 (2000) Science 287, 1824-7.Hao, M. 等。 (1996) J Biol Chem 271, 29380-5.Lu, H. 等。 (1997) Mol Cell Biol 17, 5923-34.Ullrich, S.J.等。 (1993) Proc Natl Acad Sci U S A 90, 5954-8.Kohn, K.W. (1999) Mol Biol Cell 10, 2703-34.Lohrum, M. 和 Scheidtmann, K.H. (1996) 致癌基因 13, 2527-39.Knippschild, U. 等。 (1997) Oncogene 15, 1727-36.Oda, K. 等。 (2000) Cell 102, 849-62.Ito, A. 等人。 (2001) EMBO J 20, 1331-40.Sakaguchi, K. 等人。 (1998) Genes Dev 12, 2831-41.Solomon, J.M. 等人。 (2006) Mol Cell Biol 26, 28-38.Pathways

探索与该产品相关的通路。

选择您的通路AMPK SignalingApoptosis RegulationErbB/HER SignalingG1/S CheckpointG2/M DNA Damage CheckpointMitochondrial Control of ApoptosisPI3K/Akt SignalingProtein AcetylationRegulation P38 MAPKsSAPK/JNK 信号级联Warburg 效应×上游/下游蛋白质

STRING - 已知和预测的蛋白质-蛋白质相互作用。

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UniProt ID：P04637

Entrez-Gene Id:7157

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